技術(shù)原理

技術(shù)原理 原位測序技術(shù) (In Situ Sequencing,ISS) 依賴于雙連接和滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)，它是以缺口靶向(Gap-targeted Sequencing) 或條形碼靶向 (Barcode-targeted Sequencing) 為測序策略，同時引入邊連接邊測序的化學(xué)原理（Sequencing-by-ligation Chemistry)，以滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物為測序媒介進(jìn)而在組織或細(xì)胞原位對RNA實(shí)現(xiàn)短片段測序的技術(shù)。

技術(shù)流程

(1)定制探針：針對用戶提供的基因的非保守區(qū)設(shè)計(jì)探針并合成

(2)樣本前處理：將冰凍切片退凍、固定、脫水和透化，以便探針和反應(yīng)所需的酶等成分進(jìn)入組織細(xì)胞內(nèi)部

(3)探針雜交與滾環(huán)擴(kuò)增：探針與RNA雜交，之后連接成環(huán)；通過滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)放大編碼信號

(4)原位成像：利用邊合成邊測序的化學(xué)原理，通過采集熒光信號得到對應(yīng)位置的編碼堿基；經(jīng)過序列解碼，可識別出該位置靶向結(jié)合的基因

(5)圖像分析：獲得每個靶基因在組織中的空間表達(dá)位置，用不同符號(或顏色)標(biāo)記在同一張組織圖像中；通過細(xì)胞邊界識別等方法得到單細(xì)胞水平的基因表達(dá)定量數(shù)據(jù)，可進(jìn)行高級分析

產(chǎn)品優(yōu)勢

(1)高效、特異、高敏

(2)高信噪比

(3)可實(shí)現(xiàn)256種靶標(biāo)分子檢測

(4)亞細(xì)胞分辨率

技術(shù)優(yōu)勢

1. 冷凍組織OCT包埋樣本或者切片
2. 石蠟包埋組織樣本或者切片（FFPE樣本） 
3. 細(xì)胞爬片樣本等